CRISPR/Cas9基因编辑

CRISPR/Cas9系统使用引导RNA （gRNA）与Cas9内切酶一起在目标位点的DNA中产生双链断裂。断裂将通过非同源末端连接（NHEJ）修复，这往往会增加或删除碱基对，导致帧移位突变（KO小鼠）。或者，如果在注射混合物中包含修复DNA，则可以通过同源定向修复（HDR）修复DNA断裂，从而允许基因靶向插入（KI小鼠）。

CRISPR试剂被注射到受精的单细胞期胚胎中，微注射的胚胎被转移到假怀孕的母亲体内，假怀孕的母亲会发育、分娩和哺育突变的后代。利用CRISPR技术培育出基因定向的创始小鼠需要2 ~ 4个月的时间。我们已经成功地利用这项技术创造了以下突变：

  • KO突变
  • 单点突变KI
  • 同时表位（2-3X） KI
  • 插入表位标签（< 2kb）生成标记融合蛋白
  • 基因缺失（大小< 1kb）
  • 条件KO：同时插入关键外显子5 ‘和3 ’的LoxP位点

甘林，博士，基因组编辑中心主任

服务

全面的诱变

  • 协商讨论项目目标。
  • 生物信息分析，靶向策略和靶向构建体及其他试剂的设计，PCR基因分型方法的设计和测试。
  • 通过CRISPR/Cas9显微注射靶向制备C57BL/6J背景的种系质量创始小鼠。
  • 用C57BL/6J小鼠进行种系传代（GLT）育成杂合小鼠和GLT F1基因型幼鼠。
  • 保证每个项目的交付：将一对或多对杂合小鼠转移给研究者

提供材料的显微注射

  • PI可以提交DNA模板和grna， core将提供Cas9 mRNA或蛋白。
  • 不能保证任何创建小鼠将产生或将包含所需的编辑等位基因，因为最终结果取决于靶向效率以及基因位点和靶向设计的突变效果，以及用户提供的试剂的质量（纯度和毒性）。
  • 每次显微注射，我们将注射≥150个C57BL/6J胚胎，将胚胎移植给假妊娠雌性。
  • 尾端活检将提供给研究者的实验室进行基因分型。幼鼠将在断奶时转移给研究者。

Synthego的化学修饰sgRNA

  • 该核心为Synthego的化学修饰sgRNA订单提供折扣价格。

定制CRISPR/Cas9项目设计及试剂

  • 该核心将设计靶向和基因分型策略，并生成针对小鼠基因组特定位置的CRISPR/Cas9试剂（一个sgRNA和一个DNA模板）。